§30. Расчет линейного увеличения органоидов. Различие между разрешением и увеличением оптического и электронного микроскопов

Цель изучения этой темы: определить фактический размер компонентов клеток.

Как определить размер клеток и органоидов по микрофотографии, если указан масштаб увеличения, т. е. на фото показано, сколько микрометров в 1 сантиметре изображения на фото?

Что нужно повторить для успешного изучения темы? § 2 – учебник для 9 класса; моделирование № 1 – учебник для 9 класса.

  Различие между разрешением и увеличением. Увеличение – это показатель силы микроскопа или иного увеличительного прибора, во сколько раз увеличивается изображение объекта. Разрешающая способность – это способность прибора отобразить раздельно два мелких объекта, чтобы их изображение не сливалось в одно.
  Еще с позапрошлого века считается, что у разрешающей способности светового микроскопа есть строго ограниченный предел разрешения. Так как микроскоп световой, его возможности ограничены физическими величинами. Это ограничение объясняется постоянным физическим показателем – длиной световой волны.

  Разрешение микроскопа можно рассчитать по формуле: λ/(2nsin u), где λ – длина волны света, n – показатель преломления среды, находящейся между рассматриваемым объектом и ближайшей линзой микроскопа, u – угол между оптической осью объектива и самыми крайними лучами, которые проходят сквозь рассматриваемый объект и через объектив попадают в глаз человека. Обычно считается, что разрешение составляет половину длины волны света. Но можно несколько улучшать показатели, изменяя преломление n. В вакууме n = 1. У воздуха этот показатель очень близок к единице, у воды составляет 1,33303, у специальных жидкостей, используемых в микроскопии для получения максимального разрешения, доходит до 1,78. При этом, каким бы ни был угол u, величина sin u не может быть больше единицы. Таким образом, разрешение оптического микроскопа не превышает долей длины волны света.

  Световой микроскоп. Такой микроскоп стандартной конструкции имеет разрешение 0,2 мкм, что соответствует увеличению примерно в 1500 раз. Тем не менее данный показатель примерно в 500 раз превосходит зрение человека.
  Что же значит ограничение разрешения микроскопа на практике? Это означает, что если бы удалось получить микрофотографию, изображающую две линии, отстоящие друг от друга на расстоянии меньше чем на 0,2 мкм, то сколько бы вы ни добавляли увеличение, эти две линии сливались бы в одну. Иными словами, различить их было бы невозможно.
  Современному школьнику это легче понять, вспомнив процесс увеличения цифровых фотографий. Если разрешающая способность фотоаппарата была маленькой, сколько бы вы ни увеличивали изображение, например на мониторе компьютера, вам не удастся разглядеть мелкие детали, так как их изображение будет сливаться. Вы увидите одно изображение, состоящее из непонятных расплывчатых пятен. Иначе говоря, различить форму и размеры мелких объектов, как и границы между ними, при плохом разрешении, даже повышая увеличение, невозможно. Такое увеличение часто называют бесполезным. Ведь изображения, которые вы не видели до увеличения, не станут видимыми, они просто будут более размытыми.
  Долгое время считалось, что любой микроскоп, основанный на проникновении света сквозь объект, будет ограничен этим показателем, который стали называть дифракционным пределом. Размеры многих клеточные структур гораздо меньше 0,2 мкм (а это 200 нанометров!). Они могут быть в десятках и единицах нанометров, например толщина мембраны 7–8 нм, размеры бактериальных рибосом до 20 нм, некоторые вирусы 30–300 нм и т. д. Биологам стало казаться, что изучение клетки и всего микромира с помощью микроскопии исчерпает себя, если не будет найдено иное техническое решение. Физики нашли такое решение.
  Электронный микроскоп. В 30–50-х годах ХХ в. на смену световому микроскопу пришел электронный. Данное изобретение позволило делать фотографии и рассматривать четкое изображение объектов с увеличением в 250 тыс. раз.
  Общий принцип работы электронного микроскопа сходен со световым с той лишь разницей, что через объект проходит пучок направленных электронов, а не фотонов света. Как вы помните, свет направляется сквозь объект с помощью зеркала. Если же объект толстый и свет сквозь него не проходит, то изображения мы не увидим. Примерно так ведет себя и электронный микроскоп. Чтобы быть проницаемыми для потока электронов, микропрепараты должны быть очень тонкими, тоньше, чем в световом микроскопе. Еще одной особенностью является тот факт, что пучок электронов подается на объект «сверху», а не «снизу», как было с пучком света. Между объектом, пучком электронов и линзами должен быть вакуум. Иначе столкновения электронов о частицы воздуха сделают процесс неэффективным. Подача электронов идет с большим напряжением – 50 000 В. Поток электронов, в отличие от пучка света, не попадает в глаз человеку, так как электроны в отличие от фотонов не могут вызвать возбуждение фоторецепторов, и никакого изображения мы не увидим. Электроны направляются на флуоресцирующий экран, на котором ученый и рассматривает изображения через боковые линзы. Сравним некоторые характеристики работы электронного и светового микроскопа, приведенные в табл. 6.

  Оптический и световой микроскопы. Эти два термина часто используются как слова-синонимы. Вместе с тем в последнее время ведутся успешные исследования, улучшающие возможности световых микроскопов. Именно такие улучшенные их версии чаще называют оптическими. Возникает вопрос: зачем улучшать световой микроскоп, если уже создан электронный? На самом деле причин много. Главной, пожалуй, является то, что в электронный микроскоп можно рассматривать только мертвые клетки. Наблюдать через него живые объекты невозможно. Другие недо- статки электронного микроскопа – чисто технические. Это дороговизна в создании и обслуживании, затраты на помещение, сопутствующее оборудование, подготовку специалистов по работе и обслуживанию, сложность изготовления препаратов, их высокая цена и т. д.
  Поэтому физики-оптики продолжают работать над созданием улучшенной версии оптического микроскопа. Со временем и электронные, и оптические микроскопы стали снабжать разнообразными устройствами, позволяющими запоминать изображения. Человеческий глаз дополнили сначала обычные фото- и кинокамеры, а после и цифровые. Количество пикселей в цифровых камерах продолжает расти, однако само по себе это не может улучшить разрешение оптических микроскопов. И все же успешные исследования в этом направлении ведутся (см. дополнительный текст в задании «Оценка»).

  Увеличение, разрешающая способность, световой, электронный, оптический микроскопы.

Знание и понимание
1. Как вы понимаете разницу между разрешением и увеличением микроскопа?
2. Опишите виды микроскопов.

Применение
1. Для чего изобретают и применяют различные виды микроскопов?
2. Проведите сравнение между электронным и световым микроскопом, отметив знаком × признак в соответствующем столбце.

Анализ
1. Изобразите в виде схемы устройство электронного и светового микроскопа, показав их сходство и различия.
2. Проанализируйте этапы процесса усовершенствования микроскопов. Почему возникла необходимость создать электронный микроскоп? Почему продолжаются попытки усовершенствовать световой (оптический) микроскоп?

Синтез
Оцените линейное увеличение органоидов на предложенной микрофотографии. Рассчитайте реальные размеры названных органоидов, указав единицы измерения и параметры – длина, ширина, диаметр (для округлых объектов), а также примерные размеры клетки (длина и ширина).

Оценка
1. Оцените эффективность применения современных электронных, световых и оптических микроскопов.
2. Обсудите следующую научно-популярную статью.
  Российские ученые предложили новую конфигурацию наноскопов
  В группе немецкого ученого Штефана Хелля (Stefan Hell) из Института биофизической химии научного сообщества Макса Планка (Геттинген) в сотрудничестве с аргентинским ученым Мариано Босси (Mariano Bossi) в 2006 г. был разработан оптический микроскоп под названием «наноскоп», позволяющий преодолевать барьер Аббе¹ и наблюдать объекты размером около 10 нм (а на 2010 г. и еще меньше), оставаясь в диапазоне видимого излучения, получая при этом высококачественные трехмерные изображения объектов, ранее недоступных для обычной световой и усовершенствованной оптической микроскопии.
Ведутся работы над получением кристаллов нитрида бора с гексагональной решеткой (hBN) из чистых на 99% изотопов бора. Такой материал линз за счет поляритонов, образующихся на поверхности кристалла, позволяет многократно понизить дифракционный предел и достичь разрешений порядка десятков и даже единиц нанометров.
Российские ученые из Томского государственного политехнического университета усовершенствовали наноскоп, использовав в нем не микролинзы, как в классической конфигурации, а специальные дифракционные решетки с золотыми пластинками. При получении изображения с такого прибора срабатывают одновременно эффект аномальной амплитудной аподизации, резонанс Фабри – Перо и резонанс Фано. Вместе они и помогают увеличить разрешение, по сравнению с обычной дифракционной решеткой, до 0,3 λ. (Автор статьи – доктор технических наук Игорь Минин).
3. Оцените научные и экономические последствия применения наноскопов – модернизированных оптических микроскопов.

 ¹  Эрнст Аббе – немецкий физик-оптик, автор формулы λ/(2nsin u) . Эта формула считается настолько знаменитой, что именно ее высекли на памятнике автору.

  Заключение по разделу «Клеточная биология»

  Все органоиды клетки подразделяются на группы. В зависимости от выбранного принципа они могут подразделяться по количеству мембран, по содержанию в клетках представителей разных царств эукариот или по особенностям строения. Различать различные органоиды на микрофотографиях – одна из целей изучения данного раздела. По внешнему строению, отраженному на микрофотографии, можно отличить ряд органоидов по внешним признакам. Так, например, хлоропласты и митохондрии, как правило, хорошо различимы по выраженным гранам и кристам.
  Жгутики, реснички и клеточный центр также хорошо видны на микрофотографиях как упорядоченные нитчатые структуры, расположенные или близ ядра (центриоли) или выступающие за пределы мембраны клетки (органоиды движения), в поперечном разрезе образующие характерную систему с формулой 9+2. Ядро легко различить по размеру, центральному положению в клетке и внутренним структурам в виде глыбок хроматина и (или) ядрышка.
  Вакуоли, лизосомы, пероксисомы и диктиосомы могут быть внешне похожи, все они имеют пузырчатую структуру. Но в стареющих растительных клетках легко опознать вакуоль из-за ее размеров. Видя наличие или отсутствие пластид и других характерных органоидов, можно сделать вывод о типах клеток (животные или растительные). По их расположению относительно наружной мембраны и комплекса Гольджи можно делать выводы об иных пузырчатых органоидах.
  ЭПС и комплекс Гольджи различаются по размеру, расположению (по всей цитоплазме ЭПС, а не вблизи ядра) и наличию рибосом на шероховатой ЭПС. Рибосомы всегда отражаются на микрофотографиях как точечные структуры. Их размеры зависят не столько от особенностей клеток и строения самих рибосом, сколько от качества микрофотографии.
  Несмотря на развитие разных методов цитологических исследований, основным методом изучения строения клеток остается микроскопирование. Световые микроскопы имеют ограниченные длиной световой волны пределы увеличения. Считалось, что разрешающая способность светового микроскопа не превосходит 200 нанометров, или 0,2 мкм. Использование электронного микроскопа, когда через рассматриваемый микрообъект пропускается не свет, а пучок электронов, решило эту проблему. Электронный микроскоп позволяет рассматривать объекты меньше 1 нанометра (0,5–0,2 нм). Недостаток электронного микроскопа – невозможность рассматривать живые объекты, черно-белое изображение, общая сложность и дороговизна как самого микроскопа, так и микропрепаратов. В связи с этим ученые продолжают искать технические решения, позволяющие усовершенствовать как световой, так и электронный (трансмиссионный) микроскопы, в частности снабжая их цифровыми камерами, снимающими микроизображения.

×
×

Корзина